换一批转录因子SP1调控lncRNA NKILA对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的影响
Transcription Factor SP1 Regulates the Effect of lncRNA NKILA on the Apoptosis of Hypertrophic Scar Fibroblasts
摘要目的 探讨转录因子特异性蛋白1(specificity protein 1,SP1)在NF-κB相关性长链非编码 RNA(NF-κB interacting long non-coding RNA,NKILA)影响增生性瘢痕成纤维细胞凋亡中的作用.方法 提取并培养增生性瘢痕组织及其瘢痕旁邻近的正常皮肤组织中人皮肤成纤维细胞作为实验细胞系,免疫荧光鉴定成纤维细胞;qRT-PCR检测人瘢痕旁正常皮肤组织来源的成纤维细胞(NSFBs)和增生性瘢痕组织来源的成纤维细胞(HSFBs)中NKILA mRNA的表达水平;构建NKILA的干扰片段,实验分组为:空白对照组、si-NC组、si-NKILA 1组、si-NKILA 2组、si-NKILA 3组,qRT-PCR检测si-NKILA干扰效率;Western blot检测空白对照组、si-NC组、si-NKILA组HSFBs中凋亡指标Bcl-2和Bax的表达水平,流式细胞术检测各组HSFBs凋亡率;构建SP1的干扰片段,实验分组为:空白对照组、si-NC组、si-SP1 1 组、si-SP1 2 组、si-SP1 3 组,qRT-PCR 检测 si-SP1 的干扰效率;qRT-PCR 检测干扰转录因子SP1后HSFBs中NKILA mRNA的表达水平.结果 与NSFBs相比,NKILA在HSFBs中表达明显升高(P＜0.001).干扰NKILA表达后,Bax蛋白表达水平与Bcl-2蛋白表达水平比值显著增加(P＜0.001),HSFBs凋亡率明显增加(P＜0.001);干扰转录因子SP1表达后,HSFBs中NKILA的表达下降(P＜0.01).结论 lncRNA NKILA抑制增生性瘢痕成纤维细胞凋亡,且受转录因子SP1调控.
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