换一批尼达尼布通过TGF-β1/Smad信号通路调控人瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖及胶原蛋白的产生
Nintedanib Regulates the Proliferation of Human Keloid Fibroblasts and the Production of Collagen Through the TGF-β1/Smad Signaling Pathway
摘要目的 探讨尼达尼布对瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblasts,KFs)增殖、迁移、细胞外基质(ECM)相关蛋白表达以及TGF-β1/Smad通路的影响.方法 利用成品进行KFs培养.将KFs分为空白对照组、DMSO组、尼达尼布浓度组(分别为0.5、1、2、4和8 μmo l/L),每组培养24h后,采用CCK-8实验检测KFs增殖情况.利用细胞划痕实验检测2 μmol/L尼达尼布在不同时间段下(0、24、48 h)对KFs迁移能力的影响.根据CCK-8的结果将尼达尼布分为4组,依次为空白对照组,低、中、高浓度组(1、2、4 μmol/L),通过Western blot实验分别检测Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、纤连蛋白(FN)及相关蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达情况.而后再将其分为空白对照组、SB-431542(5 μmol/L)干预组、尼达尼布(2 μmol/L)干预组、SB-431542(5 μmol/L)联合尼达尼布(2 μmol/L)干预组,培养24 h.通过Western blot实验探索尼达尼布对TGF-β1/Smad信号通路蛋白的表达情况.结果 根据CCK-8实验法得出尼达尼布处理KFs 24 h后,随着浓度的增加,细胞存活率呈现下降趋势,在药物浓度为8 μmol/L作用24 h后,抑制KFs效果最为显著.细胞划痕实验显示,与空白对照组相比,2 μmol/L尼达尼布组KFs迁移能力受到显著抑制(P＜0.01);Western blot显示尼达尼布可下调Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、FN、α-SMA 蛋白表达,并且可降低 TGF-β1/Smad 通路中Smad2及Smad3磷酸化蛋白表达.结论 尼达尼布可能通过TGF-β1/Smad信号通路,抑制KFs增殖、迁移及细胞外基质相关蛋白的表达.
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