光老化成纤维细胞中m6A甲基化修饰的差异表达
Differential Expression of m6A-Methylated mRNA in Photoaged Human Fibroblasts
摘要目的 研究中波紫外线(UVB)诱导的光老化成纤维细胞及正常细胞中mRNA的N6-甲基腺苷(m6A)甲基化修饰水平的差异表达.方法 体外培养人成纤维细胞,用UVB照射建立光老化模型.将细胞分为对照组和照光组,对照组给予常规培养,照光组给予多次重复照射UVB(总剂量51 mJ/cm2).采用CCK-8和流式法检测细胞活性及细胞周期,β-半乳糖苷酶检测细胞衰老,Western blot和qRT-PCR检测衰老标志物p16、p21和p53的蛋白及mRNA表达水平,m6A微阵列芯片检测m6A差异表达的mRNA谱,并通过基因本体论(GO)分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析进行结果分析.结果 通过UVB照射成功建立光老化模型.与对照组相比,照光组中m6A甲基化修饰差异表达的mRNA共2 749个,表达上调的有1 163个,表达下调的有1 586个(P<0.05且Fold change≥1.5).GO富集分析发现差异表达的基因主要参与DNA重组修复、有丝分裂、应激、代谢等生物学过程;KEGG通路富集分析发现在p53、肿瘤坏死因子(TNF)、核转录因子kappa B(NF-κB)等通路明显富集.结论 UVB诱导的光老化成纤维细胞与正常细胞之间存在m6A甲基化修饰差异表达的mRNA,这些差异表达的mRNA可以为后续临床研究提供思路.
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