摘要背景与目的:目前,肝细胞癌(HCC)的治疗仍面临复发和转移的严峻挑战,而肿瘤免疫逃逸是导致这些问题的关键机制之一.信号转导与转录激活因子3(STAT3)作为重要的转录因子,在多种恶性肿瘤中呈现过度激活状态,不仅参与肿瘤的发生与进展,还与肿瘤免疫逃逸密切相关.程序性死亡配体1(PD-L1)是关键的免疫检查点,其表达上调能够帮助肿瘤细胞逃避免疫监视,从而抑制抗肿瘤免疫.研究显示,STAT3可能通过与蛋白激酶DNA激活催化多肽(PRKDC)的相互作用激活骨髓细胞瘤病毒癌基因(MYC)信号通路,进而促进PD-L1的表达并诱导免疫逃逸.然而,STAT3/PRKDC/MYC轴在HCC中的具体作用机制尚不明确.本研究旨在揭示STAT3通过PRKDC/MYC信号通路调控PD-L1表达并可能诱导HCC免疫逃逸的分子机制,以期为HCC免疫治疗提供潜在靶点.方法:用qRT-PCR和Western blot检测人正常肝细胞(HL-7702)与人HCC细胞(HuH-7、HepG2)中STAT3的表达.构建敲低STAT3(si-STAT3)和过表达PRKDC(oe-PRKDC)质粒,以及各自的阴性对照(si-NC、oe-NC)质粒,按实验设计分别转染至HCC细胞(HuH-7)中,以无处理的HuH-7细胞为空白对照.采用Western blot分析各组细胞STAT3、PRKDC、PD-L1和MYC通路相关蛋白的表达.采用CCK-8、Transwell、划痕试验和流式细胞术评估HCC细胞的增殖、侵袭、迁移和凋亡.将HuH-7细胞与人外周血单个核细胞(hPBMC)共培养后,采用ELISA法检测免疫调节因子干扰素γ(IFN-γ)的含量.采用免疫共沉淀和免疫荧光共定位验证STAT3与PRKDC蛋白之间的相互作用.结果:qRT-PCR和Westernblot结果显示,HCC细胞中STAT3的mRNA和蛋白表达水平均明显升高(均P＜0.05).功能实验结果显示,si-STAT3组HCC细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显减弱,细胞凋亡明显升高;PD-L1和MYC通路相关蛋白的表达水平明显下调;与hPBMC共培养后IFN-γ的分泌水平明显升高(均P＜0.05).与oe-PRKDC质粒共培养后,STAT3敲低对HCC细胞的以上影响均被明显逆转(均P＜0.05).Scansite 4.0数据库分析结果显示,STAT3与PRKDC存在结合位点,免疫共沉淀与免疫荧光共定位实验表明STAT3与PRKDC蛋白的相互作用.结论:STAT3在HCC细胞中高表达,并可通过与PRKDC相互作用促进HCC细胞增殖、迁移和侵袭以及免疫逃逸,抑制细胞凋亡,并激活MYC通路,增加PD-L1表达,STAT3/PRKDC/MYC轴可能是HCC免疫治疗的潜在靶点.