换一批利用IDO的双向作用重建肝移植后乙肝主动免疫的体外实验
Establishment of Active Immune Against HBV after Liver Transplantation with Ad-IDOEGFP-preS in Vitro
摘要目的 观察双目的基因吲哚胺2,3-二氧化酶(IDO)和乙型肝炎病毒前S抗原(HBV preS)在肝癌细胞株HepG2细胞的表达及其对人外周血淋巴细胞(PBLC)的抑制作用.方法 将前期制备的重组腺病毒Ad-IDOEGFP-preS转染HepG2细胞,用倒置荧光显微镜观察增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达,RT-PCR检测目的基因IDO和HBV preSmRNA的表达;与人PBLC共培养,同位素标记法观察IDO对其增殖的抑制作用.结果 HepG2细胞在转染3 d后即可见明显的EGFP表达,7 d后荧光更强,提示目的基因已成功导入HepG2细胞.RT-PCR显示感染Ad-IDOEGFP-preS重组腺病毒的HepG2细胞中含有IDO和HBV preS基因片段.IDO相对表达强度为1.27,HBV preS相对表达强度为1.18,而对照组HepG2细胞未出现IDO和HBV preS基因片段.与其共培养的淋巴细胞每分钟放射线计数(CPM)为(7 471±1 375)次/min,明显低于对照组CPM[(13 821±1 997)次/min],P<0.001.结论 重组腺病毒Ad-IDOEGFP-preS能有效地将目的基因IDO和HBV preS导入HepG2细胞并表达,携带该基因的HepG2细胞对PBLC的增殖具有明显的抑制作用,这将为进一步的肝移植乙肝主动免疫动物实验奠定基础.
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