含弓形虫ROP1基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究Ⅴ.IFN-γ基因真核表达重组质粒的构建及其在DNA免疫中基因佐剂的作用

VACCINATING MICE WITH EUKARYOTIC EXPRESSION RECOMBINANT PLASMID DNA CODING RHOPTRY PROTEIN 1 GENE FROM TOXOPLASMA GONDII V.Constructing Eukaryotic Expression Recombinant Plasmid Containing Interferon-Gamma Gene and Its Effects as a Genetic Adjuvant with DNA Vaccine

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摘要目的构建IFN-γ基因真核表达重组质粒作为基因佐剂,观察其与pcDNA3-ROP1(pc-ROP1) DNA共同免疫小鼠所诱导的免疫应答.方法将IF N-γ基因片段定向插入真核表达载体pcDNA3,双酶切鉴定,获得pcIFN重组子;碱裂解法大量制备,经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,每只鼠注射pcIFN、pc-ROP1各100μg,两周后同量加强免疫一次,以pcDNA3空质粒及生理盐水组为对照.分别于免疫后第30天、50天、70 天共三次用MTT法测定小鼠脾脏T淋巴细胞增殖活性及NK细胞活性;双夹心ELISA测定血清细胞因子IFN-γ、IL-2及酶法测定NO含量;ELISA法测定IgG抗体滴度.结果构建成功的作用下,该两项指标均明显提高,且IFN-γ、IL-2及NO水平均较不加佐剂组显著提高(P＜0.01);而对IgG抗体滴度无显著影响(P＞0.05).结论 IFN-γ基因佐剂具有协同pc-ROP1DNA免疫的作用,可增强免疫鼠细胞免疫应答,IFN-γ、IL-2细胞因子及NO的产生.