换一批
换一批摘要目的构建弓形虫主要表面抗原P30基因的原核表达载体并在E.coli中表达。方法根据已发表的弓形虫P30基因序列，自行设计合成一对引物并在引物5'端分别引入限制性内切酶EcoRI、SalI酶切位点，用PCR技术从弓形虫RH株基因组DNA中扩增P30基因片段，插入pMALP2质粒转化大肠杆菌DH5a α感受态细胞，于氨苄LB培养平板上筛选阳性克隆，经过酶切及PCR扩增签定重组子。将阳性重组子经IPTG诱导表达，SDS-PAGE及免疫印迹分析。结果从弓形虫RH株DNA中扩增出976bp的P30基因，构建成功pMALP2～P30重组质粒；SDS-PAGE电泳及Western-blot显示MBP/P30融合蛋白条带的分子量约为77.5kD，减去MBP的分子量43kD，得出P30蛋白分子量为34.5kD，且能被弓形虫高免鼠血清识别。结论从弓形虫基因组DNA中获取P30基因，并成功构建pMALP2-P30重组质粒，诱导表达了P30的融合蛋白。为进一步P30蛋白的分离纯化及其对动物的免疫原性研究作好准备。
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