换一批
换一批截短的弓形虫P30基因在E.cOli中的高效表达及纯化条件的探索
HIGHLY EXPRESSION AND PURIFICATION FO TRUNCATED RECOMBINANT P30 OF TOXOPLASMA GONDII IN E. COLI
摘要目的构建能在E.coli中高效表达的弓形虫主要表面抗原(P30)基因的重组表达质粒，并对纯化条件进行优化。方法 对已知的弓形虫P30基因序列进行部分取舍，用PCR技术从弓形虫ZS1株的基因组DNA中扩增出截短的P30基因片段，插入载体pET-30(a)中，转化大肠杆菌DH5 α，IPTG诱导表达，包涵体经洗涤、变性、复性及不同程度的浓缩后，进行SDSPAGE及免疫印迹分析。结果从弓形虫ZS1株基因组DNA中扩增出截短的P30基因片段，成功构建重组表达质粒pETP30；SDS-PAGE显示蛋白表达带的分子量约为31kD，表达量占菌体总蛋白的31.58％，经1M及2M尿素洗涤后，其纯度分别达63.42％及75.74％；免疫印迹显示，该纯化蛋白能被弓形虫病人阳性血清所识别，而且当浓缩至初始体积的1/3～1/6时，纯化蛋白与DNA免疫鼠血清的反应最强。结论成功构建重组质粒pET-P30，并以融合蛋白的形式进行了高效表达，经变性、复性后，该蛋白具有特异的免疫反应性，为弓形虫诊断试剂盒的研制打下基础。
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