换一批
换一批幽门螺杆菌Mr26 000外膜蛋白真核载体的构建及表达蛋白的鉴定
Construction of the eukaryotic expression vector for the gene encoding the 26 kDa outer membrane protein of Helicobacter pylori and identification of the expressed proteins
摘要目的构建含人幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)26 000外膜蛋白编码基因的真核重组载体,并在COS-7细胞中表达,为核酸疫苗的开发奠定基础.方法从原核表达质粒pET32a(+)/594中,酶切H.pylori 26 000外膜蛋白编码基因片段,将目的基因与同样进行酶切、纯化的载体pcDNA3.1进行连接,而后转化并筛选含有目的基因的重组载体pcDNA3.1/594,并在COS-7细胞中表达,以RT-PCR,Dot blot法检测其表达产物.结果经酶切证实插入的基因片段为H.pylori 26 000外膜蛋白编码基因;采用RT-PCR方法,能够从转染COS-7细胞中扩增出一条与目的基因大小一致的DNA片段;同时Dot blot法等检测显示,该重组质粒能够在COS-7细胞中表达目的蛋白.结论成功地构建了真核重组载体pcDNA3.1/594,并在COS-7细胞中表达,为H.pylori核酸疫苗的研制奠定了良好的基础.
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