换一批
换一批幽门螺杆菌融合蛋白HspA-UreB在大肠杆菌中的表达与鉴定
Expression and identification of fusion protein HspA-UreB from Helicobacter pylori in E.coli
摘要目的在大肠杆菌中表达幽门螺杆菌(简称Hp)HspA-UreB融合蛋白,并探索其免疫反应性,为Hp基因工程疫苗的研制奠定基础.方法用PCR方法扩增郑州分离Hp菌株MEL-HP27的hspA 和ureB基因,分别克隆入pNEB193中.测序后,回收两种基因片段,并以hspA-ureB的顺序连接插入原核表达载体pMAL-C2x进行融合表达.采用蛋白印迹法对表达产物进行鉴定.结果特异PCR法和酶切鉴定证实融合基因hspA-ureB克隆入表达载体中;重组质粒转化大肠杆菌TB1后,经IPTG诱导3h,SDS-PAGE电泳显示在119 kDa处出现一条特异蛋白带,即麦芽糖结合蛋白(MBP)与HspA-UreB的融合表达形式,约占细菌总体蛋白含量的31%;该融合蛋白与Hp免疫小鼠血清和Hp阳性病人血清的Western blot分析结果显示,在119 kDa处出现特异杂交带.结论成功地在大肠杆菌中实现了Hp融合蛋白HspA-UreB的高效表达,并证实其具有良好的免疫反应性.
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分类号
R573.2
栏目名称
论著
DOI
10.3969/j.issn.1002-2694.2004.10.006
发布时间
2004-11-24
基金项目
河南省医学科技人才创新工程项目
河南省科技攻关项目
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