换一批
换一批刚地弓形虫P30(SAG1)重组抗原的高效表达和体外纯化
Over-expression and purification of the recombinant p30 antigen of Toxoplasma gondii
摘要目的表达和纯化弓形虫P30(SAG1)蛋白,为弓形虫病快速诊断试剂盒及蛋白质疫苗的研制奠定基础.方法 PCR法从弓形虫基因组DNA 中扩增 P30基因片段,P30产物克隆到表达质粒pET-30a(+) 构建重组载体,将其转化到DH5α中.经PCR扩增和质粒酶切及基因测序鉴定后,阳性重组质粒转化到大肠埃氏菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.大量的诱导表达产物用SNBC 3S NTA Resin方法纯化并进行复性.结果扩增的P30基因片段为750bp, 重组表达融合蛋白量单位为30ku,与理论值相符.结论成功构建重组体,获得纯化和复性的弓形虫主要表面抗原P30的高效表达产物,为弓形虫病的诊断和疫苗研究奠定了基础.
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