换一批
换一批SYBR Green荧光PCR检测美洲钩虫方法的建立
Developing SYBR green fluorescent quantitative PCR for detecting Necator americanus
摘要目的 建立荧光定量PCR检测美洲钩虫的方法.方法 提取虫体基因组DNA、根据GenBank中美洲钩虫ITS-2序列设计特异引物,PCR扩增ITS-2序列、克隆、测序和比对.常规PCR检验引物特异性.将ITS-2序列扩增产物回收、纯化后经T克隆转入大肠埃希菌DH5α,提取重组质粒,鉴定后作为标准品模板建立荧光定量PCR标准曲线,并做灵敏性和重复性试验.结果 构建的荧光定量PCR标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,溶解曲线的吸收峰单一,实验重复性良好.结论 成功构建了SYBR Green I荧光定量PCR检测美洲钩虫的方法,可用于快速、准确、定量检测美洲钩虫.
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