换一批结核分枝杆菌CFP10-ESAT6-TB7.7的融合表达及其在小鼠上的细胞免疫学特性
Fusion expression of CFP10-ESAT6-TB7.7 of Mycobacterium tuberculosis and its cellular immunoproperties in mice
摘要目的 构建结核分枝杆菌CFP10-ESAT6-TB7.7融合蛋白的表达质粒,利用大肠杆菌表达系统获得原核蛋白,在小鼠模型上评价其细胞免疫学特性.方法 通过PCR扩增出lhp-linker-esat6-linker和linker-Rv2654c片段,构建正确的pET32a(+)-lhp-linker-esat6-linker-Rv2654c原核表达质粒,转化BL21(DE3)后在IPTG诱导下表达,并纯化该融合蛋白,western blot验证蛋白的免疫原性,通过T细胞增殖实验和夹心ELISA评价其细胞免疫学特性.结果 成功构建pET32a(+)-lhp-linker-esat6-linker-Rv2654c原核表达质粒,SDS-PAGE显示在45 kDa处出现目的 条带,Western blot证明融合蛋白对anti-ESAT6,anti-CFP10,anti-His单抗和rGST-TB7.7多抗血清均有反应,说明该融合蛋白具有良好的免疫反应性,T淋巴细胞增殖实验显示该蛋白能明显引起小鼠的T细胞免疫反应.夹心ELISA实验也表明,融合蛋白刺激产生的IFN-γ和IL-4水平与对照组相比均有显著性差异,同时融合蛋白诱导产生的IFN-γ水平明显高于IL-4.结论 CFP10-ESAT6-TB7.7融合蛋白在大肠杆菌系统中实现可溶性表达,并获得免疫反应性良好的纯化产物,该融合蛋白能引起明显的T细胞增殖,具有诱导Th1型免疫应答的特性.
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关键词
结核分枝杆菌CFP10-ESAT6-TB7.7融合蛋白原核表达细胞免疫Mycobacterium tuberculosisCFP10-ESAT6-TB7.7prokaryotic expressioncellular immunoproperties
分类号
Q378（植物遗传学）
栏目名称
DOI
10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2014.02.005
发布时间
2014-03-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家"973"项目（(2012CB518805)）
国家公益性行业科研专项（(200903027)）
江苏省农业三新工程（(No.SXGC(2012)402)）
江苏高校优势学科建设工程资助项目联合资助Supported by the National Basic Research and Development Program of China（(2012CB518805)）
the National Department Public Benefit Research Foundation（(200903027)）
the Jiangsu Three Novel Engineering Foundation of Agriculture （(No.SXGC(2012)402)）
the Priority Academic Program Development of Jiangsu Higher Education Institutions
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