基于GroEL基因的实时荧光定量PCR检测恙虫病东方体方法的建立及评价

Establishment and evaluation of real-time PCR assay for detection of Orientia tsutsugamushi based on the GroEL gene

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摘要目的建立一种敏感、特异的实时荧光定量PCR方法,用于检测临床标本中的恙虫病东方体.方法根据恙虫病东方体GroEL蛋白基因序列设计引物和探针,建立实时荧光定量PCR检测方法.并从灵敏度、特异度、重复性及临床标本的检测能力等方面对本方法进行综合评价.结果建立的实时荧光定量PCR方法具有良好的特异性,可检测出恙虫病东方体Gilliam、Karp、Kato和Kawasaki株.建立的标准曲线循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈现良好的线性关系(r=0.99),灵敏度分析显示样品最低检出浓度为21.8拷贝/μL.批内及批间重复性实验变异系数均小于1.5％,显示本方法具有良好的重复性.对本实验室保存的82份临床标本进行检测,并与常规巢式PCR方法比较,本方法检测出26份阳性标本中的25份,检出率为96.15％.结论本研究建立的实时荧光定量PCR方法具有较高的敏感性、特异性和稳定性,可用于临床病人及暴发疫情的实验室快速检测.

作者谈忠鸣 ^[1] 李志峰 ^[1] 吴斌 ^[1] 胡建利 ^[1] 祁贤 ^[1] 顾玲 ^[1] 鲍倡俊 ^[1] 汤奋扬 ^[1] 朱叶飞 ^[1] 学术成果认领

作者单位江苏省疾病预防控制中心卫生部肠道重点实验室,南京,210009 ^[1]

关键词恙虫病东方体荧光定量PCR GroEL蛋白基因临床标本 Orientia tsutsugamushi real-time PCR GroEL clinical specimens

主题词荧光(Fluorescence)方法(Methods)丛林斑疹伤寒(Scrub Typhus)基因(Genes)蛋白(Egg White)

分类号 R376

栏目名称 实验研究

DOI 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2014.11.007

发布时间 2014-12-25

基金项目

the Jiangsu Province Health Development Project with Science and Education the Special Fund for Preventive Medicine of Jiangsu Province “十二五”科教兴卫工程 江苏省预防医学项目