换一批
换一批蓝氏贾第鞭毛虫胞外核酸酶的表达纯化和活性鉴定
Prokaryotic expression and characterization of Giardia lamblia extracellular nuclease
摘要目的 克隆、原核表达蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,贾第虫)的胞外核酸酶编码区,并对其蛋白产物进行活性鉴定.方法 对贾第虫胞外核酸酶(GeNuc)蛋白进行生物信息学分析,根据分析结果以C2株贾第虫基因组DNA为模板扩增获得GeNuc去信号肽段编码区序列,双酶切连入原核表达载体pET-28a(+),将酶切和测序验证正确的重组质粒转化E.coli Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE及Western blot鉴定蛋白产物.Ni-NTA亲和层析纯化GeNuc蛋白,经复性后验证其对质粒DNA的水解能力.结果 成功克隆了长约800 bp的GeNuc编码区并构建了原核表达载体pET-28a(+)-GeNuc,测序结果显示C2株GeNuc序列与WB株相同;在大肠杆菌中诱导表达获得了相对分子量约30.8 kDa的融合蛋白;复性后的纯化GeNuc蛋白具有降解双链DNA的能力,但活性较商品化DNase Ⅰ低.结论 证明了GeNuc的存在,为GeNuc抗体的制备及贾第虫致病机制的研究提供了实验材料.
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关键词
蓝氏贾第鞭毛虫胞外核酸酶生物信息学原核表达活性鉴定Giardia lambliaextracellular nucleasebioinformaticsprokaryotic expressionactivity determination
分类号
R382.21
栏目名称
实验研究
DOI
10.3969/j.issn.1002-2694.2016.01.014
发布时间
2016-05-17
基金项目
the National Natural Science Foundation of China
the Hebei Province Science Foundation for Youths
国家自然科学基金
河北省青年科学基金
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