换一批田鼠巴贝虫感染FTA-环介导等温扩增检测技术的建立
Development of loop-mediated isothermal amplification (LAMP)assay combined with FTA card for detecting Babesia microti
摘要目的 建立敏感、特异、高效的检测田鼠巴贝虫FTA-环介导等温扩增技术(LAMP).方法 根据GenBank公布的田鼠巴贝虫基因序列,就细胞色素B基因保守序列设计了多套LAMP引物,利用LAMP RealTime Turbidimeter LA-320仪筛选最佳引物、反应条件,建立LAMP检测方法,从保存有血液样本的FTA卡片中提取田鼠巴贝虫DNA进行LAMP,观察检测效果.结果 设计的4组引物做LAMP试验,其中以引物1,最佳反应温度为64℃,恒温下作用,敏感性高,可在1h内完成,其检出限量为0.687 fg/μL,而PCR的最低检测量为0.687 pg/μL,与间日疟原虫、恶性疟原虫、卵形疟原虫、三日疟原虫、诺氏疟原虫、冈地弓形虫、利什曼原虫、冈比亚锥虫均无交叉反应.以建立的FTA-LAMP法检测20份PCR检测阳性的田鼠巴贝虫感染者血样,其阳性符合率100％.结论 成功建立了检测田鼠巴贝虫特异性细胞色素B基因的FTA-LAMP方法,该法特异性强、灵敏度高、简便、快速、适于现场应用.
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关键词
田鼠巴贝虫环介导等温扩增技术FTA卡细胞色素B基因Babesia microtiloop-mediated isothermal amplification (LAMP)FTA cardcytochrome B gene
分类号
R382（医学寄生虫学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1002-2694.2016.05.004
发布时间
2016-06-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
公益性卫生行业科研专项经费资助项目（(201202019)）
上海市卫生计生委青年基金项目（(20154Y0155)）
the Special Fund for Health Research in the Public Interest（(201202019)）
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