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抗博尔纳病病毒磷蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

Preparation and identification of monoclonal antibody against phosphoprotein of Borna disease virus

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摘要目的以重组的博尔纳病病毒(BDV)磷蛋白(p24)为免疫原制备单克隆抗体,并鉴定其特异性.方法以纯化后的重组BDVp24免疫小鼠,将骨髓瘤细胞与其脾细胞进行融合,经ELISA法筛选出分泌抗p24单抗的细胞株,并对其进行克隆与亚克隆培养,将最终获得的其中2株细胞株分别注入小鼠腹腔制备单抗,经亲和纯化法纯化后,采用ELISA法测定效价,利用蛋白免疫印迹和免疫荧光鉴定其特异性.结果建立了2株稳定分泌抗p24单抗的杂交瘤细胞株,抗体亚类均为IgG1型.纯化后的腹水抗p24单抗纯度为98％和93％,ELISA效价在1∶81 000以上,该抗体均能识别重组p24蛋白和BDV感染人类少突胶质细胞(Oligodendroglia cell,OL细胞)所表达的p24蛋白.结论成功制备了灵敏性高、特异性好的抗BDVp24单抗,为博尔纳病病毒诊断方法的研制及感染机理的研讨提供依据.

作者马丽华 ^[1] 邓榕 ^[2] 徐晓艳 ^[1] 杨宏静 ^[3] 谢鹏 ^[4] 学术成果认领

作者单位重庆三峡医药高等专科学校基础医学部,万州404120;重庆医科大学神经科学研究中心,重庆 400016 ^[1] 重庆三峡中心医院神经内科,万州,404120 ^[2] 重庆三峡医药高等专科学校基础医学部,万州,404120 ^[3] 重庆医科大学神经科学研究中心,重庆,400016 ^[4]

关键词博尔纳病病毒磷蛋白类单克隆抗体 Borna disease virus (BDV)phosphoproteins monoclonal antibody

医学主题词病毒(Viruses)抗体, 单克隆(Antibodies, Monoclonal)蛋白(Egg White)细胞(Cells)磷(Phosphorus)

分类号 R392（医学免疫学）

栏目名称

实验研究

DOI 10.3969/j.issn.1002-2694.2017.09.005

发布时间 2017-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）