换一批EMA实时荧光PCR技术检测食品中单核增生李斯特活菌方法研究
New EMA real-time fluorescence PCR method for detection of alive Listeria monocytogenes in foods
摘要目的 利用叠氮溴化乙錠(EMA)实时荧光PCR技术,建立直接检测食品中单增李斯特活菌的方法.方法 根据单核李斯特菌inlA基因设计特异性引物和探针.用不同EMA浓度、不同光照次数优化样品前处理条件.用平板计数法验证该方法的检出限及对死菌的抑制率.用35株单增李斯特菌、25株非单核李斯特菌、92株非李斯特菌验证该方法特异性.用添加了不同剂量的单增李斯特死菌、活菌及金黄色葡萄球菌的15件饮料,15件熟肉制品进行模拟实样检测.结果 单增李斯特活菌EMA实时荧光PCR方法的Ct=(38.46-3.30)×log(菌量)(R2 =0.999).最低检测的活菌浓度为55 cfu/反应.对死菌DNA抑制效率≥99.98％.35株单增李斯特菌Ct值最低16.21,最高29.38,而25株非单单增李斯特菌、92株非单增李斯特菌的Ct值均大于35或无Ct值.重复试验Ct值变异系数小于5％.30件模拟实样单增李斯特菌的检测结果与常规方法完全一致.且EMA实时荧光PCR方法检出时间仅需10h左右,而常规分离培养方法需要5～7 d.结论 EMA实时荧光PCR检测技术是一种快速、简便、特异性强、灵敏度高、仅检测单增李斯特菌活菌的有效方法,可作为食品中检测单增李斯特活菌的方法推广使用.
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DOI
10.3969/j.issn.1002-2694.2017.11.011
发布时间
2018-01-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
浙江省公益类科技计划项目（(2015C37058)）
浙江省医药卫生科技计划项目（(No.2016KYB065)）
Supported by the Public Welfare Technology and Application Project of Zhejiang Province（(2015C37058)）
the Medical Scientific Research Foundation of Zhejiang Province（(2016KYB065)）
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