换一批
换一批家蝇抗菌肽MAF-1A的串联表达与抗白念珠菌体外活性检测
Tandem expression and anti-Candida albicans activity determination of antimicrobial peptide MAF-1A from Musca domestica
摘要目的 构建家蝇抗菌肽MAF-1A基因原核串联表达体系,在大肠杆菌中表达具有抗菌活性的MAF-1A.方法 根据大肠杆菌密码子的偏嗜性进行密码子优化,设计并合成含有5个拷贝的MAF-1A串联基因序列;将合成的串联基因序列克隆到表达载体pET28a并转化大肠杆菌Roseeta(DE3),应用IPTG诱导表达5×MAF-1A串联重组蛋白;通过SDS-PAGE电泳、Western Blot对表达产物进行分析;用肠激酶专一性切割经Ni-NTA纯化后的5×MAF-1A重组串联蛋白,得到MAF-1A单体;采用微量稀释法检测MAF-1A单体对白念珠菌的体外抗菌活性.结果 5×MAF-1A蛋白在大肠杆菌中呈可溶性表达,28℃、0.8 mmol/L IPTG诱导12h可达最大表达量;酶切后的抗菌肽MAF-1A单体对白念珠菌的MIC和MBC分别为0.5 mg/mL、1.0 mg/mL.结论 成功构建MAF-1A原核串联表达系统,重组表达的MAF-1A对白念珠菌具有较高的抑杀活性.
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分类号
R384
栏目名称
论著
DOI
10.3969/j.issn.1002-2694.2018.00.056
发布时间
2019-05-27
基金项目
国家自然科学基金
贵阳市科技局-贵州医科大学联合基金
贵州省科技合作计划
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