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猪源Pdm/09 H1N1甲流NA定点突变拯救毒株的生物特性研究

Biological characteristics and virus rescue of a pig-sourced Pdm/09 H1N1 NA protein strain generated through site-directed mutagenesis

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摘要目的利用定点突变技术突变Pdm/09 H1N1流感病毒的NA基因119位点并拯救,研究其生物特性.方法利用重叠PCR的方法进行定点突变,再应用反向遗传学体系中的pBD-NA质粒后在293T细胞中转染拯救流感病毒,通过血凝试验和RT-PCR方法鉴定病毒拯救结果,通过细胞学和攻毒试验研究该位点变异的生物学意义.结果定点突变测序结果显示,突变的pBD-NA质粒核苷酸第336位由A突变为G,使氨基酸位点发生E(核苷酸:GAA)到G(核苷酸:GGA)的变化,而其他位置的氨基酸均未发生改变.拯救的病毒转染后的细胞悬液接种MDCK细胞连续传代3代后突变毒株(rMT)血凝效价为27,亲本毒株(rWT)为26.神经氨酸酶的二级结构预测结果显示,rMT与rWT相比,Alpha Helix分值明显下降,均值同比下降约为10.62％,经突变后的rMT Alpha Helix结构分值表现为下降趋势.用rWT和rMT病毒攻毒BABL/c小鼠后第3天的小鼠肺组织、鼻甲骨、脾和肾的病毒滴度,rMT攻毒组均比rWT攻毒组高,鼻甲组织与肺脏中的病毒滴度相比差异不显著,脾和肾的差异显著.结论 NA119位点的定点突变对病毒的复制能力没有明显影响,突变株对BABL/c小鼠的致病力有一定增强,临床症状明显,神经氨酸酶活性下降.

作者程倩 ^[1] 孔子荣 ^[2] 李三木 ^[1] 李献 ^[1] Muhammad Junaid ^[1] 张书祥 ^[3] 何奇松 ^[4] 熊毅 ^[4] 孙文博 ^[5] 颜健华 ^[1] 学术成果认领

作者单位广西大学医学院,南宁530000 ^[1] 广西大学医学院,南宁530000;广西大学动物科学技术学院,南宁 530000 ^[2] 广西大学动物科学技术学院,南宁 530000 ^[3] 广西壮族自治区动物疫病预防控制中心,南宁530000 ^[4] 山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南 250100 ^[5]

关键词猪流感 H1N1 定点突变病毒拯救

分类号 R373（医学微生物学《病原细菌学、病原微生物学》）

栏目名称

实验研究

DOI 10.3969/j.issn.1002-2694.2022.00.129

发布时间 2023-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

基金项目

国家自然科学基金（No.31660713）国家自然科学基金（No.31200123）