换一批
换一批幽门螺杆菌CagA与YWHAE互作区段的确定
Determination of the regions of Helicobacter pylori CagA mediating the interaction with YWHAE
摘要目的 探讨幽门螺杆菌CagA蛋白与宿主细胞YWHAE蛋白相互作用的区段.方法 先在酵母细胞水平构建CagA区段蛋白[-N、-M、-(N+M)、-C]的表达载体,经"滤纸法"检测、一对一交配试验及"ONPG液相法"分析,筛选互作区段;进而在哺乳动物细胞水平,选用Cos7细胞经共转染、Co-IP方法确定互作区段,选用AGS细胞经上调/下调YWHAE表达、共转染、双荧光素酶报告基因检测等分析细胞NF-κB活性检测CagA候选区段与YWHAE互作的功能.结果 成功构建CagA蛋白的N、M、(N+M)和C区段的酵母表达载体,CagA各区段蛋白"滤纸法"检测反式激活特性均为阴性,"一对一"交配后"液相法"筛选到CagA区段[-N、-(N+M)、-C]分别可与YWHAE在酵母中相互作用;Cos7细胞实验确定CagA区段[-N、-C]可分别沉淀外源性YWHAE,AGS细胞中CagA区段[-N、-C]对细胞NF-κB的激活,上调YWHAE能增强、下调YWHAE则抑制.结论 幽门螺杆菌CagA蛋白N-末端与C-末端均分别与宿主细胞YWHAE蛋白相互作用,并可激活细胞NF-κB.
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分类号
R378
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1002-2694.2022.00.126
发布时间
2023-03-15
基金项目
福建省自然科学基金项目（No.2018J01837）；
福建省自然科学基金项目（No.2020J02019）
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