疥螨Sar s 14.3过敏原蛋白原核表达及间接ELISA方法的建立

Prokaryotic expression of Sar s 14.3 allergen from Sarcoptes scabiei and establishment of an indirect ELISA method

二维码有效期 120s

摘要目的预测疥螨猪变种转录组中过敏原蛋白,对Sar s14.3过敏原蛋白进行生物特性分析、原核表达并建立间接ELISA诊断方法.方法利用转录组测序(RNA-Seq)及BLAST、ProtParam、I-T ASSER和COMPARE等软件和数据库对疥螨猪变种转录组中的过敏原组分进行预测并对疥螨Sar s 14.3过敏原蛋白序列进行理化性质分析、结构分析、同源性分析和间接ELISA诊断方法的建立.结果在疥螨猪变种的18 980个转录本中共预测出390条过敏原序列,且随机匹配可能性值(E-value)为0的序列有28条.Sar s 14.3过敏原蛋白的理论相对分子质量为38 kDa,蛋白较稳定,为亲水性蛋白;二级结构以无规卷曲和β-折叠为主,其氨基酸序列与疥螨其他变种主要过敏原组分14蛋白序列相似性不低于99.76％,而与尘螨属螨虫的相似性最高为73.08％,与现行的形态学分类系统一致.所建立的间接ELISA诊断方法的最佳包被抗原浓度为2μg/mL,血清最佳稀释倍数是1∶ 400.结论本试验成功预测了疥螨猪变种转录组中的过敏原序列并克隆、表达了疥螨猪变种Sar s 14.3蛋白,初步预测了其分子特征,并以该过敏原蛋白为基础成功建立了一种快速的间接ELISA检测方法,可用于疥螨病的初步诊断和流行病学调查.

作者李鑫 ^[1] 唐志强 ^[1] 张浩吉 ^[1] 唐文强 ^[2] 党志胜 ^[3] 孙悦翔 ^[1] 李静 ^[1] 叶碧锦 ^[1] 黄福强 ^[1] 学术成果认领

作者单位佛山科学技术学院,佛山 528225 ^[1] 西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所,拉萨850009 ^[2] 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所,国家热带病研究中心,世界卫生组织热带病合作中心,科技部国家级热带病国际联合研究中心,卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室,上海 200025 ^[3]

关键词疥螨猪变种转录组生物信息学 Sar s 14.3过敏原 ELISA

分类号 R384.4

栏目名称 实验研究

DOI 10.3969/j.issn.1002-2694.2022.00.184

发布时间 2023-03-30

基金项目

广东省自然科学基金项目