摘要目的 探究蛋白激酶D(PKD)在人类冠状病毒229E(HCoV-229E)复制中的作用及潜在分子机制.方法 以MRC-5细胞作为模型,采用qPCR和Western blot检测PKD家族基因和蛋白的表达水平;通过siRNA敲除Prkd 3及PKD抑制剂(CRT0066101)抑制PKD活性,检测HCoV-229E感染细胞后的复制水平;通过CCK8检测细胞活性,TCID50测定病毒滴度,免疫荧光染色检测HCoV-229E的表达和反式高尔基体网络(TGN)的结构;通过检测磷脂酰肌醇4,5-二磷酸(PI(4,5)P2)的水平反映磷脂酰肌醇4-激酶Ⅲβ(PI4KⅢβ)活性;采用PI4KⅢ抑β制剂(BQR695)抑制PI4K活Ⅲβ性,检测HCoV-229E感染细胞后的TGN的结构变化和HCoV-229E复制水平;采用CRT0066101抑制Vero-E6细胞的PKD活性,检测HCoV-229E感染后的的复制水平.结果 PKD家族基因和蛋白表达水平在HCoV-229E感染过程中明显增加,包括Prkd1、Prkd2和Prkd3;与对照组相比,敲低 PKD3 显著抑制 HCoV-229E 的 mRNA 水平和滴度(t=8.999,P＜0.001;t=6.920,P＜0.001),过表达 PKD3 则增加了 HCoV-229E 的 mRNA 水平和滴度(t=6.630,P＜0.001;t=5.794,P＜0.001);CRT0066101 也显著抑制HCoV-229E的mRNA水平和滴度(t=6.931,P＜0.001;t=4.055,P＜0.01),免疫荧光染色结果表明,CRT0066101抑制HCoV-229E感染导致的TGN裂变;抑制PI4KⅢβ活性显著降低PI(4,5)P2水平,且BQR695挽救了 PKD过表达导致的PI(4,5)P2 水平升高(t=6.671,P＜0.01),BQR695 降低了 HCoV-229E 感染细胞的 TGN 裂变,HCoV-229E mRNA 水平和滴度(t=5.151,P＜0.001;t=7.744,P＜0.001);CRT0066101 抑制 HCoV-229E 在 Vero-E6 细胞中的 mRNA 水平和滴度(t=7.480,P＜0.001;t=7.228,P＜0.01).结论 本研究揭示了 PKD 通过调控 PI4KⅢβ 影响 TGN 的裂变参与 HCoV-229E复制,并证明PKD抑制剂和PI4KⅢβ抑制剂对降低HCoV-229E的复制具有显著作用,这些发现为今后研究冠状病毒感染的治疗提供重要的参考依据.