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鼠疫耶尔森菌低钙应答V抗原人源单克隆抗体筛选与鉴定

Screening and identification of human monoclonal antibodies against low-calcium response V antigen of Yersinia pestis

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摘要目的筛选抗低钙应答V抗原(LcrV)的人源单克隆抗体,分析抗体基因特点,检测抗体与抗原结合的特异性、亲和力及功能.方法使用PCR方法从鼠疫疫苗临床试验志愿者外周血细胞cDNA扩增抗体轻、重链可变区基因片段,构建ScFv噬菌体抗体文库.用LcrV对文库进行富集筛选,将获得的抗体基因表达成人IgG1后,测定抗体与LcrV抗原结合的特异性、亲和力、免疫调节功能以及保护能力.结果成功构建了鼠疫耶尔森菌人源ScFv抗体文库,库容量为7.54× 108.抗体文库经LcrV筛选后获得了 3株抗LcrV抗体,命名为RV-B4、RV-D1和RV-E8.3株抗体重链为VH1-46和VH3-30,轻链分别为VL1-51、VK3-20和VK1-39.3株抗体经ELISA及Western blot验证均与LcrV特异性结合,其与V抗原结合的解离常数(KD)分别为2.1 nmol/L、1.24 nmol/L和42 nmol/L.RV-D1体外降低人THP-1分泌TNF-α,动物攻毒试验中未发现抗LcrV抗体的保护效果.结论从鼠疫疫苗免疫人群获得了靶向低钙应答V抗原的人源抗体,以结合抗体为主,不能有效阻断病菌感染.所获得的单抗为鼠疫免疫基础研究、鼠疫诊断应用提供了候选材料.

作者张黎 ^[1] 郑滨洋 ^[2] 张琪 ^[3] 吴海莲 ^[3] 潘红星 ^[2] 朱凤才 ^[2] 吴海生 ^[3] 周剑芳 ^[4] 学术成果认领

作者单位 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,传染病溯源预警和智能决策全国重点实验室,北京 102206;江苏省疾病预防控制中心,南京 210009 ^[1] 江苏省疾病预防控制中心,南京 210009 ^[2] 青海省地方病预防控制所,西宁 810021 ^[3] 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,传染病溯源预警和智能决策全国重点实验室,北京 102206 ^[4]

关键词鼠疫耶尔森菌低钙应答V抗原噬菌体展示重组抗体保护效果 Yersinia pestis low-calcium response V antigen phage display recombinant antibody protective effect

分类号 R378.6+1（医学微生物学《病原细菌学、病原微生物学》）

栏目名称

实验研究

DOI 10.3969/j.issn.1002-2694.2024.00.014

发布时间 2024-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）