换一批多房棘球蚴囊泡来源EVs及其emu-miR-10-5p促进小鼠肝星状细胞活化
Echinococcus multilocularis metacestode vesicle-derived EVs containing emu-miR-10-5p promote mouse hepatic stellate cell activation
摘要目的 明确多房棘球绦虫囊泡来源胞外囊泡(Extracellular vesicles,EVs)及其emu-miR-10-5p在体外调节HSCs活化中的作用.方法 小鼠腹腔注射原头节构建继发性多泡型包虫病模型,以小鼠体内病灶为材料培养多房棘球绦虫囊泡并进行PCR鉴定.透射电镜观察培养囊泡组织中胞外囊泡结构.差速-超速离心法分离囊泡培养上清中EVs,透射电镜、纳米粒径以及Western blot对分离EVs进行鉴定.CCK-8检测不同浓度EVs作用后HSCs活力.EVs作用于HSCs后RT-qPCR和Western blot检测α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ表达水平.生物信息学分析确定emu-miR-10-5p为特异性miRNA.过表达 emu-miR-10-5p 后 EdU 检测 HSCs 增殖,RT-qPCR 个 Western blot 检测细胞中 α-SMA、Collagen Ⅰ 和 Colla-gen Ⅲ表达水平.干扰囊泡组织中emu-miR-10-5p后提取培养上清液中EVs作用于HSCs后,检测HSCs细胞中α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ表达水平.结果 成功通过小鼠体内病灶材料培养出多房棘球蚴囊泡,经PCR扩增特异性基因证实为多房棘球绦虫来源.TEM观察培养囊泡表面有较多的囊状结构.通过差速-超速离心分离出多房棘球蚴囊泡来源EVs,并经TEM证实为球形、膜状结构.囊泡来源EVs能被HSCs内化,并促进HSCs增殖和活化.通过综合分析多房棘球绦虫感染小鼠血清、棘球蚴组织、棘球蚴囊泡来源EVs、生发层细胞、原头节miRNA测序结果,发现emu-miR-10-5p在上述成分中均存在表达,并通过RT-qPCR证实emu-miR-10-5p在多房棘球蚴囊泡来源EVs中存在的量较高.进一步研究证实过表达emu-miR-10-5p能促进HSCs增殖,增加HSCs中α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ mRNA及蛋白表达水平.而干扰囊泡中emu-miR-10-5p后从培养上清液中提取的EVs未增加α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ mRNA及蛋白表达水平.结论 多房棘球蚴囊泡来源EVs及emu-miR-10-5p能够促进HSCs活化.
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