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含内参的登革和寨卡病毒三重RT-qPCR检测方法的建立与评估

Development and evaluation of a triplex RT-qPCR assay with internal references for detection of the Dengue and Zika viruses

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摘要目的本研究旨在建立一种登革病毒以及寨卡病毒并含人类基因为内参的三重RT-qPCR检测方法,可以同时检测出内参、登革病毒以及寨卡病毒.方法针对登革病毒4种血清型的保守区域和寨卡病毒的NS1基因以及人类各个组织中稳定表达的β-actin基因,设计3组特异性引物和探针.构建4种血清型的登革病毒、寨卡病毒以及β-actin标准质粒作为阳性质控品,采用L9(34)正交实验方法确定最佳反应条件,对其特异性、灵敏性及覆盖面进行验证与临床评估,并与检测登革病毒的商品化试剂盒进行了一致性评估.结果本实验建立的三重RT-qPCR检测方法与12种相近虫媒病毒无非特异性交叉反应;对登革病毒与寨卡病毒的检测灵敏度分别为2.99和2.18 copies/μL组内和组间重复性变异系数均在1.5％以内;与商品化试剂盒相比较,该检测方法对13株登革流行病毒均可获阳性结果;经过Bland-Altman 一致性分析,商品化试剂盒和该方法对临床阳性样本检测结果一致性达到92.59％.结论本研究建立了一种特异性强、灵敏度高的含内参的登革病毒和寨卡病毒三重RT-qPCR检测方法,可作为登革病毒与寨卡病毒感染者的早期快速鉴别诊断的有效工具,也可用于病毒暴发地区的快速筛查.

作者曹孟涛 ^[1] 胡潇予 ^[2] 杨微 ^[1] 李春缘 ^[3] 徐晓立 ^[4] 任瑞文 ^[3] 蒋红霞 ^[1] 学术成果认领

作者单位华南农业大学兽医学院,广东省兽药研发与安全评价重点实验室,广州 510642 ^[1] 华南农业大学兽医学院,广州 510642 ^[2] 南部战区疾病预防控制中心,广州 510507;广东省虫媒病毒性传染疾病应急技术研究中心,广州 510507 ^[3] 华南农业大学测试中心,广州 510642 ^[4]

关键词三重RT-qPCR 登革病毒寨卡病毒内参 triplex RT-qPCR Dengue virus Zika virus internal reference

分类号 R373.3（医学微生物学《病原细菌学、病原微生物学》）

栏目名称

实验研究

DOI 10.3969/j.issn.1002-2694.2024.00.080

发布时间 2024-08-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）