换一批弓形虫RH株ROP16Ⅰ蛋白通过JAK-STAT3途径对MH-S细胞增殖及细胞周期影响的研究
Toxoplasma gondii RH strain ROP16Ⅰ protein affects proliferation and the cell cycle in MH-S cells through the JAK-STAT3 pathway
摘要目的 探究Ⅰ型弓形虫RH株ROP16蛋白对小鼠肺泡巨噬细胞株MH-S细胞增殖及细胞周期的影响和机制.方法 将ROP16,过表达慢病毒感染MH-S细胞后经嘌呤霉素筛选获得稳定表达ROP16Ⅰ的过表达细胞株.RT-qPCR和Western-blot验证过表达效果,cck-8检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期变化.Western-blot及RT-qPCR检测p53、p21、CDK6、Cyclin D1、STAT3、p-STAT3(Y705)及 JAK1 蛋白或基因的表达水平,免疫荧光检测 ROP16Ⅰ与 p-STAT3(Y705)在MH-S细胞中的亚细胞共定位.结果 ROP16,过表达慢病毒感染MH-S细胞后可检测到ROP16Ⅰ蛋白及基因表达.cck-8检测发现ROP16Ⅰ可促进MH-S细胞增殖(P＜0.01),提升细胞活力.流式细胞术检测发现ROP16Ⅰ过表达可使MH-S细胞细胞周期G0/G1期降低,G2期、S期升高.相较于MH-S细胞组、MH-S-vector组,MH-S-ROP16细胞组p53及p21 蛋白表达降低,CDK6、Cyclin D1、p-STAT3(Y705)及 JAK1 蛋白表达升高,p53 及p21mRNA 表达降低,CDK6 及 Cyclin D1 mRNA表达升高(均P＜0.01).免疫荧光检测发现ROP16Ⅰ与p-STAT3(Y705)共同定位于细胞核及其周围细胞质中.结论 Ⅰ型弓形虫RH株ROP16蛋白可激活JAK-STAT3途径,诱导细胞周期G0/G1期缩短,G2/S期延长,促进细胞增殖,为揭示弓形虫的免疫逃避机制提供了理论依据,为弓形虫肺炎防治研究奠定了理论基础.
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