换一批人A组轮状病毒VP6蛋白的原核表达及其小鼠多克隆抗体的制备
Prokaryotic expression of human group A rotavirus VP6 protein and preparation of mouse polyclonal antibodies
摘要目的 表达和纯化人A组轮状病毒VP6蛋白,制备小鼠抗VP6蛋白多克隆抗体.方法 通过RT-PCR方法从人A组轮状病毒感染的粪便标本中扩增VP6基因,构建pET-32a-VP6原核表达质粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞;用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导VP6表达,采用镍柱(Ni-NTA)亲和层析纯化VP6蛋白,用SDS-PAGE和Western blotting鉴定VP6蛋白;将VP6蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,采用间接ELISA检测抗体滴度.结果 构建了pET-32a-VP6重组表达质粒,VP6蛋白主要以包涵体形式表达.经亲和层析法纯化了VP6蛋白,免疫小鼠后获得了多克隆抗体,抗体效价为1∶32 000,抗体可以和VP6蛋白发生特异性反应.结论 表达和纯化了人A组轮状病毒的VP6蛋白,制备了小鼠抗VP6蛋白的多克隆抗体,为人A组轮状病毒诊断抗原的制备和血清学检测方法的建立奠定了基础.
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关键词
人A组轮状病毒VP6蛋白原核表达多克隆抗体human group A rotavirusVP6 proteinprokaryotic expressionpolyclonal antibodies
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1002-2694.2025.00.143
发布时间
2025-11-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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