摘要目的 研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)PE/PPE家族蛋白PE_PGRS37对耻垢分枝杆菌(Myco-bacterium smegmatis,Ms)生长及巨噬细胞自噬的影响,探讨其在Mtb感染过程中发挥的作用.方法 通过PCR从Mtb基因组中扩增pe_pgrs37基因,利用同源重组法构建重组载体pAIN-PE_PGRS37.电击法将pAIN-PE_PGRS37和pAIN分别整合入Ms中,构建重组菌pAIN-PE_PGRS37/Ms和pAIN/Ms,应用Western blot方法鉴定PE_PGRS37蛋白在Ms中的表达情况.将重组菌接种于7H9/7H10培养基中观察其菌落形态及生长曲线.利用pAIN-PE_PGRS37/Ms及pAIN/Ms感染U937细胞,通过Western blot和免疫荧光检测巨噬细胞自噬流水平,菌落计数法检测重组菌的胞内存活情况.结果 成功构建重组载体pAIN-PE_PGRS37.Western blot鉴定结果显示,pAIN-PE_PGRS37/Ms中正确表达PE_PGRS37 蛋白.与pAIN/Ms相比,pAIN-PE_PGRS37/Ms的菌落形态无明显差异,生长速度在10～16 h显著增加,26 h时共同到达平台期.与pAIN/Ms感染组相比,pAIN-PE_PGRS37/Ms感染U937细胞24 h后,巨噬细胞LC3-II和p62蛋白的表达量显著上调(P<0.001),并抑制自噬体和溶酶体融合.与pAIN/Ms相比,pAIN-PE_PGRS37/Ms可以在12 h,24 h和48 h时显著增加其在巨噬细胞中的存活(P<0.05).结论 PE_PGRS37蛋白通过阻断巨噬细胞自噬流从而抑制巨噬细胞自噬,促进分枝杆菌在巨噬细胞中存活.