摘要目的 探究结核分枝杆菌PPE65蛋白的分子生物学功能,为结核病防控提供基础数据.方法 通过生物信息学软件预测PPE65基因编码蛋白的基本生物学性质;利用NCBI网站获取结核分枝杆菌Rv3621c基因及PPE65蛋白序列的基本信息,以H37Rv基因组为模板,PCR法扩增Rv3621c基因,将其构建到pET22b(+)表达载体,将构建成功的pET22b(+)-PPE65重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中经IPTG诱导表达;对PPE65重组蛋白进行可溶性分析、纯化和鉴定;使用不同浓度PPE65蛋白处理BEAS-2B细胞24 h,经CCK-8细胞增殖检测试剂盒检测其细胞数量.结果 PPE65由413个氨基酸组成,蛋白的分子式为C1819H2810N482O556S11,相对分子质量为40 679.88,理论等电点为4.60,脂肪族指数为81.94,为稳定蛋白,亲水性平均值为0.319,预测为疏水性蛋白,无信号肽和跨膜区.二级结构由α-螺旋(Hh)53.03%;β-折叠(Ee)2.66%,无规则卷曲(Cc)44.31%构成.预测出有38个B细胞抗原表位和22个CTL和Th细胞抗原表位.PPE65基因全长为1 308 bp,经双酶切和测序鉴定pET22b(+)-PPE65重组质粒构建正确;经SDS-PAGE分析发现该蛋白以包涵体形式存在,纯化后蛋白在43.7 kDa处出现单一条带.Western blot结果显示,可与小鼠源性His单克隆抗体特异结合,证实PPE65蛋白成功表达.经2.5～20 μg/mL梯度浓度的PPE65蛋白处理BEAS-2B细胞后,各试验组细胞数量随着浓度升高呈现上升趋势,与PBS组相比,各试验组TGF-β 相对表达量水平显著升高(t2.5=4.893,P<0.001,t5.0=4.640,P<0.05,t10=7.535,P<0.05,t20=16.44,P<0.000 1).结论 本研究解析了PPE65蛋白的结构特征,经原核表达和纯化获得重组蛋白,并促进BEAS-2B细胞增殖,其机制可能与抑制TGF-β/Smad信号通路活化有关,为揭示PPE65蛋白在结核感染过程中的作用及调控机制提供理论依据.