换一批志贺氏菌分子伴侣蛋白DnaK、GroEL和ClpB之间的互作关系研究
Study on the interaction relationship among molecular chaperone proteins DnaK,GroEL and ClpB of Shigella
摘要目的 探究志贺氏菌分泌的酪氨酸水解蛋白酶B(ClpB)、热休克蛋白DnaK和GroEL三者之间的相互作用关系,为深入研究志贺氏菌分泌蛋白的功能奠定基础.方法 经聚合酶链式反应(PCR)扩增DnaK、GroEL和ClpB的基因片段,采用亚克隆置于真核表达载体pcDNA3.1(+),双酶切和测序验证后,转染293T细胞;采用免疫荧光(IFA)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western Blot验证DnaK、GroEL和ClpB的细胞定位、mRNA表达和蛋白表达;采用双向免疫共沉淀法(CO-IP)检测三者之间的相互作用.结果 成功构建分子伴侣蛋白DnaK、GroEL和ClpB真核表达载体pcDNA3.1(+)-DnaK、pcDNA3.1(+)-GroEL和pcDNA3.1(+)-ClpB.DnaK、GroEL和ClpB均定位于细胞质.两两共转染293T细胞,分别采用鼠多克隆抗体DnaK、GroEL和ClpB进行Western Blot和CO-IP检测,可以检测到DnaK、GroEL和ClpB蛋白的表达.结论 分子伴侣蛋白DnaK、GroEL和ClpB三者之间存在相互作用关系,为后续继续深入探索志贺氏菌分泌蛋白的功能提供一定参考.
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关键词
志贺氏菌热休克蛋白DnaK热休克蛋白GroEL酪氨酸水解蛋白酶B(ClpB)分子伴侣蛋白免疫共沉淀Shigellaheat shock protein DnaKheat shock protein GroELtyrosine protease B(ClpB)chaperone proteinco-immunoprecipitation
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1002-2694.2026.00.041
发布时间
2026-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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