摘要目的 探讨高温需求因子A2(high-temperature requirement factor A2,HTRA2)在神经毒素1-甲基-4-苯基吡啶(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)诱导的线粒体未折叠蛋白反应(mitochondrial unfolded protein re-sponse,mtUPR)模型中的作用及其他蛋白酶的代偿作用.方法 采用MPP+干预SH-SY5Y细胞,构建mtUPR细胞模型,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测细胞存活率,透射电镜观察线粒体的形态变化,荧光显微镜观察细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,免疫印迹(Western blot,WB)检测转录因子C/EBP同源蛋白(C/EBP ho-mologous protein,CHOP)、热休克蛋白E1(homo sapiens heat shock protein family E member 1)、蛋白酶YME1样三磷酸腺苷酶(YME1 like 1 ATPase,YME1L1)、酪蛋白水解线粒体基质肽酶蛋白水解亚基(caseinolytic mitochondrial ma-trix peptidase proteolytic subunit,CLPP)和线粒体离子肽酶 1(lon peptidase 1,mitochondrial,LONP1)的表达.慢病毒敲减(knock down,KD)SH-SY5Y细胞的HTRA2基因,实时荧光定量PCR法和WB法分别检测HTRA2的mRNA和蛋白的表达.用400 μmol/L MPP+诱导HTRA2-KD的SH-SY5Y细胞的mtUPR反应,CCK-8法检测细胞存活率改变,WB检测HTRA2、YME1L1、CLPP和LONP的表达改变.结果 400 μmol/L MPP+干预SH-SY5Y细胞24 h构建了mtUPR细胞模型,SH-SY5Y细胞生存率与对照组相比无明显改变,透射电子显微镜下mtUPR组的线粒体嵴及大小未发生明显变化,mtUPR组的ROS平均荧光强度是PBS组的(1.25±0.08)倍,差别有统计学意义(P=0.001),mtUPR组的CHOP、HSPE1、HTRA2、CLPP和LONP的表达水平较对照组明显升高,分别为对照组的(2.68±0.94)倍、(2.83±0.89)倍、(1.67±0.20)倍、(1.65±0.28)倍和(1.66±0.13)倍,差别有统计学意义(均P<0.05),mtUPR组的YME1L1表达水平为对照组的(1.28±0.27)倍,差异无统计学意义(P>0.05).慢病毒敲减SH-SY5Y细胞的HTRA2基因后,CLPP、YME1L1和LONP1的表达水平升高,分别为空病毒组的(1.46±0.79)倍、(1.41±0.12)倍和(1.32±0.25)倍(均P<0.05).敲减SH-SY5Y细胞的HTRA2基因再予400 μmol/L MPP+干预SH-SY5Y细胞24 h,HTRA2组的SH-SY5Y细胞生存率下降为空病毒组88.4%±6.1%(P<0.001).HTRA2组的YME1L1和LONP1的表达水平与空病毒组比较无明显改变(均P>0.05),CLPP表达空病毒组的(1.88±0.62)倍,差别有统计学意义(P=0.033).结论 HTRA2是MPP+诱导mtUPR反应的重要的线粒体蛋白酶,其他线粒体蛋白酶有部分代偿HTRA2的作用.