慢病毒介导的胶质细胞系源性神经营养因子在骨髓基质细胞中的表达及其对乳胞素干预PC12细胞的保护作用

Overexpression of lentivirus-mediated glial cell line-derived neurotrophic factor in bone marrow stromal cells and its neuroprotection for the PC12 cells damaged by lactacystin

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摘要目的建立慢病毒介导的胶质细胞系源性神经营养因子(glial cellline-derived neurotrophic factor,GDNF)表达系统,体外感染骨髓基质细胞,检测过表达GDNF对蛋白酶抑制剂引起的PC12细胞损伤的神经保护作用.方法经双酶切和T4连接酶构建pLenti6/V5-GDNF表达质粒,经293FT细胞包装产生高滴度病毒.用RT-PCR、ELISA和免疫细胞化学方法检测感染骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)后GDNF的表达,并检测过表达GDNF对蛋白酶抑制剂乳胞素(1actacystin)引起的PC12细胞损伤的保护作用.结果成功构建pLenti6/V5-GDNF表达质粒,获得高滴度具有感染能力的病毒储存液(5.6×105 TU/mL).BMSCs体外被感染后能大量分泌GDNF(接近800 pg/mL),过表达GDNF能减轻乳胞素(10 μmol/L)引起的PC12细胞损伤.结论慢病毒介导的GDNF转染骨髓基质细胞后能分泌具有生物学活性的GDNF,对蛋白酶体抑制剂引起的PC12细胞损伤有保护作用.