换一批重组腺病毒携带的人GHS-R1a基因在人胚肾293细胞中的表达
Recombinant adenovirus-mediated expression of GHS-R1a in HEK 293 cells
摘要目的 构建携带GHS-R1a基因的重组腺病毒,为转基因做准备.方法 采用PCR法扩增GHS-R1a基因片段,随后亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,形成重组质粒pAdTrack-CMV-GHS-R1a.线性化的pAdTrackCMV-GHS-R1a和腺病毒骨架质粒pAdEasy1在感受态大肠杆菌BJ5183内同源重组.将线性化重组质粒pAdGHS-R1a 转染进HEK293细胞,并用激光共聚焦显微镜、RT-PCR和Westernblot技术检测绿色荧光蛋白及GHS-R1a的表达.结果 重组质粒pAdGHS-R1a经PacⅠ酶切后得到一个大于30 kb的大片段和一个4.5 kb的小片段,证明重组腺病毒质粒pAdGHS-R1a构建成功.Ad-GHS-R1a转染293细胞后24h能观察到绿色荧光蛋白的表达.RT-PCR和Westemblot均证实GHS-R1a基因能在293细胞中有效表达.结论 携带GHS-R1a基因的重组腺病毒构建成功,为进一步研究GHS-R1a的功能提供了基础.
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分类号
R3（基础医学）
DOI
10.1007/s12264-010-1228-1
发布时间
2010-09-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
the grants from the National Basic Research Development Program of China（(2007CB516701;2006CB500704)）
the National Natural Science Foundation of China（(30770757)）
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