摘要目的 Munc18被普遍认为存在于神经元细胞内,参与神经递质的释放.虽然已有研究表明在Rasmussen's脑炎病人中有Munc18自身抗体的产生,但对于Munc18的自身免疫机制目前还不清楚.本研究旨在观察Munc18是否可由神经元释放及是否部分分布于神经元细胞表面,并对Munc18抗体是否能诱导神经元损伤进行研究.方法 分离胎龄17天Sprague-Dawley胎鼠大脑皮层神经元,用Neurobasal培养基培养.培养液中的蛋白经三氯乙酸沉淀后进行免疫印迹检测,细胞表面蛋白则用EZ-Link-sulfo-NHS-LC-Biotin进行生物素标记,细胞裂解后用结合有亲和素的琼脂糖珠获取生物素标记的蛋白,随后进行免疫印迹检测.在4℃进行活细胞免疫荧光染色,观察神经元细胞表面Munc18的分布.用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放指标检测神经元损伤.结果 用免疫印迹法可在神经元培养的条件培养液中检测到Munc18蛋白.用谷氨酸(50μmol/L)处理神经元1 h后,培养液中Munc18含量显著增加,同时培养液中未检测到β-actin和syntaxinl,LDH释放也未明显增加.此外,谷氨酸处理能增强神经元表面的Munc18分布.活细胞免疫荧光染色检测到在谷氨酸处理后,神经元表面分布有Munc18,主要位于神经突起与另一神经元接触的部位以及不同神经元的神经末梢交汇部位.谷氨酸诱导的神经元表面Munc18分布增加可被NMDA受体拮抗剂MK801抑制,而AMPA受体拮抗剂未有明显的抑制作用.LDH检测显示,在培养液含有血清成份的情况下,与对照的c-Fos抗体相比,Munc18抗体可明显诱导神经元损伤.结论 一部分Munc18可由神经元释出或在神经细胞表面分布.谷氨酸可通过兴奋NMDA受体促进Munc18的释放和在神经细胞表面的分布.并且,Munc18抗体诱导的神经元损伤依赖于血清中的因子.