换一批
换一批神经元兴奋性毒性对Munc18-1蛋白在大鼠海马神经元和原代培养神经元胞核内分布的影响
Effect of neuronal excitotoxicity on Munc18-1 distribution in nuclei of rat hippocampal neuron and primary cultured neuron
摘要目的 Munc18-1在中枢神经系统递质释放过程中具有重要作用,控制着突触囊泡释放步骤的每一个环节.Munc18-1功能异常与癫痫发病相关.本文主要探讨癫痫是否会引起神经元胞核内Munc18-1定位的改变.方法 通过海马内注射海人藻酸建立Sprague-Dawley(SD)大鼠癫痫模型,腹腔注射海人藻酸建立昆明小鼠癫痫模型.分离胎龄18天SD大鼠海马神经元,用Neurobasal培养基培养7天后,用谷氨酸处理3 h.用蔗糖密度梯度离心法分离神经元和神经胶质细胞的细胞核组份,通过甲酚紫染色对上述富含细胞核的组份进行形态学鉴别.用免疫组化和免疫电镜分析法确定Munc18-1的细胞核定位.免疫印迹法检测不同细胞组分的Munc18-1蛋白的表达水平.结果 免疫组化、免疫电镜以及对神经元细胞核组份的免疫印迹证实了Munc18-1在海马神经元细胞核的分布定位.在海人藻酸诱导癫痫的动物海马内,免疫组化染色显示Munc18-1在海马CA区锥体细胞层、齿状回颗粒细胞层和门区的多型细胞表达减少.同时,免疫印迹分析表明,Munc18-1在海马神经元胞核中的表达水平明显下降.免疫印迹检测显示,原代培养神经元经50 μmol/L谷氨酸处理3 h后,Munc18-1在神经元胞核中的分布减少,而胞浆组份中含量增加.免疫荧光的形态学检测也显示部分神经元明显失去了Munc18-1在细胞核聚集分布的特征.结论 兴奋性刺激能够使Munc18-1在神经元的表达分布发生改变,这种变化可能参与调节脑神经元的功能.
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关键词
Munc18-1细胞核海人藻酸谷氨酸海马原代培养神经元Munc 18-1nucleuskainic acidglutamatehippocampusprimary cultured neurons
分类号
R742.1
栏目名称
DOI
10.1007/s12264-011-1007-7
发布时间
2011-09-05
基金项目
the National Natural Science Foundation of China（81071017;30470536;90919004）
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