换一批
换一批茂源链霉菌L-谷氨酸氧化酶的异源表达以及诱导条件优化
Heterologous expression of L-glutamate oxidase in Streptomyces mobaraensis and optimization of induction conditions
摘要L-谷氨酸氧化酶(L-glutamate oxidase,LGOX)能够专一性氧化L-谷氨酸生成α-酮戊二酸(α-ketoglutaric acid,α-KG),在食品领域以及临床生化检验中具有重要的价值.为了提高LGOX的活性,本文结合生物信息学方法和显色法,筛选得到一种新型的含有LGOX基因的茂源链霉菌株(Streptomyces mobaraensis CGMCC 4.1719),以其基因组序列为模板,通过PCR技术扩增LGOX基因,与pET21b质粒连接,构建表达载体pET21b-SmLGOX,化转至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达,并对诱导条件加以优选.通过电泳分析结果可知,SmLGOX基因在大肠杆菌中成功表达.确定了最佳诱导条件为:IPTG终浓度0.4 mmol/L,30℃下诱导6 h.纯化后在不同pH条件下测定酶活,该重组菌最适pH为6.0,且在pH=4.0～6.0时相对酶活保持在80％以上,稳定性好,适于LGOX的工业化应用.
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