换一批植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶基因在乳酸克鲁维酵母中的重组表达及酶学性质表征
Recombinant expression and enzymatic characterization of the Lactobacillus plantarum nitrite reductase gene in Kluyveromyces lactis
摘要通过构建植物乳杆菌属(Lactobacillus sp.LMY-20)中亚硝酸盐还原酶(nitrite reductase,NiR)的重组乳酸克鲁维酵母菌株、纯化重组蛋白并对其进行酶学性质表征.采用密码子优化后的亚硝酸盐还原酶基因,将其亚克隆至pKLAC2 载体,构建成重组表达质粒pKLAC2-nir,并转化至乳酸克鲁维酵母(K.lactis)中实现表达;再利用镍柱亲和层析纯化得到重组亚硝酸盐还原酶.SDS-PAGE分析结果显示,在约45 kDa位置出现与预期大小相符的蛋白质条带.酶活检测结果显示,发酵 48 小时后重组NiR达到最高酶活,酶活性约为 34 U/mg.纯化后的重组NiR的最适pH为 6.5,最适反应温度为 37℃.该酶稳定性及酶活性较好,酶活力保持在较高水平,即 90%左右.本研究成功构建了产亚硝酸盐还原酶的重组乳酸克鲁维酵母菌株并纯化获得重组亚硝酸盐还原酶,重组NiR具有良好的稳定性.
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分类号
TS201.3
栏目名称
DOI
10.19804/j.issn1006-2513.2026.3.004
发布时间
2026-03-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家重点研发计划（2022YFC2805105）
大连市科技创新基金项目（2020JJ26SN048）
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