换一批利用实时荧光定量PCR方法分析转基因水稻外源基因拷贝数
Estimating copy number of transgenes in transformed rice by real-time quantitative PCR
摘要为分析转基因水稻外源基因拷贝数,利用新型、灵敏、高通量的实时荧光定量PCR方法进行转基因水稻外源基因拷贝数的分析.转基因外源基因的拷贝数通过转基因水稻外源基因(GUS和HPT基因)和水稻内标准SPS基因含量的比较计算获得.定量分析了14株T0代的转基因水稻植株,得到了外源基因插入分别为1、2、3和4的转基因植株,同时利用Southern Blot方法进行验证分析.随机选择18个已经过定量PCR检测分析的转基因水稻植株,用Southem Blot的方法分析转基因水稻植株中的HPT或GUS基因的拷贝数,Southem Blot分析结果显示有15个转基因水稻植株的分析结果与定量PCR分析的结果是一致的,3个植株定量PCR分析的转基因拷贝数稍高于Southem Blot的分析结果,主要原因是Southern B10t方法在同一个插入位点有多拷贝的T-DNA片段插入时,转基因植株的基因组在完全酶切时会产生相似的DNA片段,电泳分析时很难分辨清楚.定量PCR方法则完全避免了这种情况的发生,除非目的基因DNA片段在PCR引物处发生断裂.两种方法分析结果的比较显示定量PCR方法分析转基因拷贝数更加有效、适用.
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DOI
10.3969/j.issn.1004-8456.2005.02.014
发布时间
2005-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
上海市科技兴农科技攻关计划重点项目（2002;03ZD05032）
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