牛奶主要过敏原β-乳球蛋白的一基因片段的克隆、表达、纯化及抗原性鉴定

Cloning, expression and allergenicity-characterization of a fragment of the major milk allergen β-lactoglobulin

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摘要目的克隆并表达牛奶中主要过敏原β-乳球蛋白(β-LG)的一基因片段,并检测其杭原性.方法利用RT-PCR技术克隆β-LG蛋白基因片段,测序后将目的片段克隆入原核表达质粗pET载体,转化至大肠杆菌origami,经IPTG诱导表达,获得重组β-LG片段蛋白.用Nit~2+亲和层析柱纯化,用Western blot和ELLSA检测重组蛋白与牛奶过敏患者血清IgE的结合活性.结果克隆获得β-LG片段蛋白,其开放阅读框基因为264 by(含终止密码子),编码87个氨基酸.获得的重组β-LG片段蛋白既以包涵体形式存在又以可溶性形式存在,用可溶性的蛋白进行纯化,经Western blot和ELISA检测具有较好的抗原性.结论成功地克隆和表达了β-LG的--基因片段,为后续牛奶的免疫原性研究提供参考,也为研制牛奶主要过敏原的单克隆抗体和制备其主要过敏原的检测试剂奠定了基础.

作者李建杰 ^[1] 陈大玮 ^[2] 闫浩 ^[2] 杨成彬 ^[2] 邓利 ^[3] 刘杰 ^[4] 刘志刚 ^[5] 黄钟 ^[5] 学术成果认领

作者单位深圳大学过敏反应与免疫学研究所,广东,深圳,518060;呼吸疾病国家重点实验室深圳大学变态反应分室,广东,深圳,518060 ^[1] 呼吸疾病国家重点实验室深圳大学变态反应分室,广东,深圳,518060 ^[2] 深圳大学生命科学院,广东,深圳,518060 ^[3] 深圳大学医学院,广东,深圳,518060 ^[4] 呼吸疾病国家重点实验室深圳大学变态反应分室,广东,深圳,518060;深圳大学医学院,广东,深圳,518060 ^[5]

关键词牛奶过敏原 β-乳球蛋白抗原性基因鉴定

主题词蛋白(Egg White)基因(Genes)性(Sex)乳(Milk)抗原(Antigens)

分类号 R72 S51

栏目名称论著

发布时间 2011-06-24

基金项目

深港创新图计划项目 深圳大学团队基金