换一批GⅡ.3型诺如病毒重组衣壳蛋白的表达和纯化鉴定
The expression, purification and identification of Norovirus GⅡ.3 capsid protein
摘要目的 通过杆状病毒表达系统,获取高纯度GⅡ.3型诺如病毒重组衣壳蛋白,为制备抗GⅡ.3型诺如病毒单克隆和多克隆抗体提供免疫原.方法 将GⅡ.3型诺如病毒衣壳蛋白基因片段修饰后插入pHTA表达载体中,经测序鉴定,将鉴定正确的重组质粒转化到MAX Efficiency(R)DH10BacTM感受态细胞中,获取表达杆粒并转染SF9细胞,表达GⅡ.3型诺如病毒重组衣壳蛋白.重组蛋白用Ni-NTA His蛋白亲和柱纯化,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白免疫印迹(Western blot)方法鉴定.结果 SDS-PAGE和Western blot结果表达了分子量约为60 kDa的重组蛋白,动物试验表明重组蛋白具有较好的免疫原性,为制备抗GⅡ.3型诺如病毒单克隆抗体和多克隆抗体、建立相应的免疫学检测方法奠定了基础.结论 构建了GⅡ.3型诺如病毒衣壳蛋白表达载体,并获得GⅡ.3型诺如病毒重组衣壳蛋白.
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关键词
重组蛋白GⅡ.3型诺如病毒杆状病毒表达系统表达纯化鉴定食品污染物食品安全Recombinant proteinNorovirus GⅡ.3Baculovirus expression systemexpressionpurificationidentificationfood contaminantsfood safety
分类号
R155（营养卫生、食品卫生）
栏目名称
DOI
10.13590/j.cjfh.2017.01.003
发布时间
2017-04-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
北京市自然科学基金（5141002）
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