换一批腰果主要过敏原Ana o 3的重组表达与鉴定
Prokaryotic expression and identification of recombinant cashew nut allergen Ana o 3
摘要目的 克隆获得腰果主要过敏原Ana o 3基因,并利用pCold-SUMO原核表达载体重组表达Ana o 3并鉴定免疫活性.方法 提取腰果总RNA,逆转录至cDNA,设计特异性引物,通过巢式PCR技术克隆腰果Ana o 3基因,将其插入pCold-SUMO vector,鉴定并测序;将测序正确的阳性质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),低温15℃诱导表达.摸索诱导表达条件,经镍柱纯化,并通过Western blot鉴定免疫活性.结果 测序结果表明,克隆腰果Ana o 3基因片段全长为417 bp,与GenBank上Ana o 3基因CDS序列基本一致;十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明,目的蛋白分子量为27 kD左右,大小与理论值相符;Western blot结果表明,与腰果过敏阳性血清具有良好的反应性.结论 从腰果中成功克隆了Ana o 3基因,并于原核系统表达了Ana o 3蛋白,证实了此蛋白与腰果过敏血清具有良好的反应性.
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关键词
腰果Ana o 3基因克隆重组表达过敏原免疫印迹食品安全Cashew nutAna o 3gene clonerecombinationexpressionallergenWestern blotfood safety
分类号
R155（营养卫生、食品卫生）
栏目名称
DOI
10.13590/j.cjfh.2017.01.008
发布时间
2017-04-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（2014KYM08）
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