换一批产气荚膜梭菌TaqMan实时荧光定量PCR特异性引物设计和方法验证
Establishment and application of a TaqMan-based real-time fluorescence quantitative PCR detection method for Clostridium perfringens
摘要目的 建立针对水样中产气荚膜梭菌检测的TaqMan实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法,并测试该方法在自来水样中的检测效果.方法 选择位于该菌拟核中高度保守的plc基因,设计特异性引物和TaqMan 探针,经优化后建立了针对该菌的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,结合滤膜法处理含有plc基因的标准菌株的模拟污染水样,并对所建立的方法进行测试.结果 所建立的产气荚膜梭菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法具有高度的特异性,13株食源性致病菌、3株艰难梭菌及1株腐败梭菌的Ct值大于40;该方法的最低检出限为1× 10copies/μL,具有较高的灵敏性;对模拟污染水样的最低检测限为1.0×102 CFU/mL.应用该方法对4份人工模拟污染阳性水样与90份自来水样进行检测发现,2份1.0×102CFU/mL的模拟污染水样可检出产气荚膜梭菌,2份1.0×10CFU/mL的模拟污染水样与90份自来水样均未检出产气荚膜梭菌.结论 所建立的产气荚膜梭菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法具有特异性好、灵敏性高的优点,对水体中产气荚膜梭菌的检测具有较高的应用价值.
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关键词
产气荚膜梭菌实时荧光定量PCRTaqMan探针法水样检测食源性致病菌Clostridium perfringensreal-time fluorescent quantitative PCRTaqMan probe methodwater sample detectionfoodborne pathogens
分类号
R155（营养卫生、食品卫生）
栏目名称
DOI
10.13590/j.cjfh.2024.02.006
发布时间
2024-05-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
宁夏自然科学基金重点项目（2022AAC02019）
宁夏回族自治区重点研发计划重点项目（2021BEF02028）
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