换一批
换一批摘要Ara h 1是花生中含量最高的过敏原,也是致敏性较高的蛋白之一.目前提纯Ara h 1的方法大多涉及2至3步柱层析,步骤繁琐且成本较高.本文中,将带有6×his标签的Ara h 1基因与pET-32a表达载体融合,构建重组质粒并转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,诱导使其表达目标蛋白.菌体裂解后使用Ni-NTA吸附、梯度洗脱对Ara h 1进行纯化.采用质谱及Western-blot鉴定纯化蛋白的种类及免疫活性.结果显示,质粒中目标基因的序列与NCBI数据库中Ara h 1的基因数据相符;300 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷22℃诱导菌液22 h时蛋白表达量最高;添加15 mmol/L十二烷基磺酸钠可将蛋白释放到上清液中,使用含50,100 mmol/L咪唑的洗脱液分别洗脱2次和1次后得到纯度较高且免疫原性良好的重组Ara h 1.
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