卵黄高磷蛋白磷酸肽在Caco-2细胞单层模型中的促钙转运作用
Pro-calcium Transport by Phosvitin Phosphopeptides in a Monolayer Model of Caco-2 Cells
摘要结合高温低压处理、胰蛋白酶和嗜热菌蛋白酶复合酶解制备具有高钙结合能力的卵黄高磷蛋白磷酸肽(Phosvitin phosphopeptides,PPP).通过优化确定制备PPP-Ca的最佳条件为pH 9.5,多肽与钙质量比7:1,此条件下钙螯合率达到97%,PPP-Ca在模拟胃肠道消化中显示了极高的稳定性.使用Caco-2细胞单层模型验证PPP-Ca在体外的钙转运作用,通过细胞形态、电阻值和荧光素钠透过率等验证Caco-2细胞模型,毒性实验(MTT)结果显示PPP-Ca对Caco-2细胞呈现低毒性作用.研究PPP-Ca和PPP对Caco-2细胞转运钙离子质量浓度和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活性的影响,采用RT-PCR测定CalbindinD9K m RNA的相对表达量.结果表明,PPP和PPP-Ca能够显著提高AKP活性,钙转运量从(3.06±0.08)μg增到(5.66±0.62)μg,CalbindinD9K m RNA的表达量增加2倍,进而增强人体肠道中钙的转运吸收.研究结果为开发新的钙补充剂和卵黄高磷蛋白提供了科学证据.
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