双重实时荧光聚合酶链式反应鉴别真鲷鱼与罗非鱼
Detection of Pagrus and Tilapia Using Dual Real-Time Polymerase Chain Reaction Method
摘要目的:建立1种利用实时荧光聚合酶链式反应(PCR)技术快速检测3种真鲷鱼与11种罗非鱼源性成分的方法.方法:以真赤鲷、金赤鲷、蓝点赤鲷cytb基因以及尼罗罗非鱼、莫桑比克罗非鱼、奥利亚罗非鱼COI基因为目标基因,分别设计2组引物和Taqman探针的组合物,以期鉴别真鲷鱼和罗非鱼成分.结果:该方法特异性良好,耗时短,反应只需1 h.实时荧光PCR试验中,真鲷鱼和罗非鱼的基因组DNA检出限均为10-2ng,质量分数检出限为0.1%.质量分数定量试验中,真鲷鱼的质量分数误差不超过±5.5%,罗非鱼的质量分数误差不超过±4.9%.双重实时荧光PCR试验中,真鲷鱼和罗非鱼的基因组DNA检出限均为10-2ng,当真鲷鱼和罗非鱼以不同质量分数混合时,真鲷鱼的质量分数检出限为20%,罗非鱼的质量分数检出限为0.1%;当真鲷鱼和罗非鱼以相同质量分数混合时,真鲷鱼的质量分数检出限为10%,罗非鱼的质量分数检出限为0.01%.结论:该方法特异性强,所需时间短,检出限低,操作简单,可满足真鲷鱼与罗非鱼真伪鉴别的要求.
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