基于高分辨熔解分析的cry1I类基因的克隆、表达及活性分析

Identification of Novel cry1I-type Genes from Bacillus thuringiensis HD-12 Strain on the Basis of High Resolution Melting Assay

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摘要　　本研究将高分辨熔解分析（high resolution melting assay，HRMA）的方法应用于cry1I类基因的分型。根据已报道的cry1I类基因的保守区设计一对扩增片段为131 bp的通用鉴定引物，利用高分辨熔点仪对产物的熔解曲线进行分析。利用此方法对本实验室保存的标准菌株HD-12进行了cry1I类基因的鉴定，克隆到2个新型的cry1Ib和cry1Id基因，被Bt国际命名委员会分别正式命名为cry1Ib11和cry1Id2。这两种基因在E. coli Rosetta菌株中能正常表达81 kDa的蛋白。Cry1Ib11和Cry1Id2蛋白对小菜蛾Plutella xylostella 二龄幼虫和亚洲玉米螟 Ostrinia furnacalis 初孵幼虫具有显著的杀虫活性，LC50分别为6.13μg·mL?1和6.10μg·mL?1及11.18μg·mL?1和1.43μg·mL?1。但对甜菜夜蛾Spodoptera exigua及鞘翅目的大猿叶甲Colaphellus bowringi均没有明显毒杀作用。高分辨溶解分析法为新型cry基因的快速、准确鉴定提供了有效的工具。