换一批人U6基因POI Ⅲ启动子表达反义VEGF cDNA抑制SMMC-7721肝癌细胞VEGF表达的观察
Inhibition of VEGF Expression in Human Hepatoma Cell Line SMMC-7721 by Antisense VEGF RNA Transcribed from U6 Gene POI Ⅲ Promoter
摘要由RNA聚合酶启动子在细胞内转录高浓度反义RNA是抑制靶蛋白的一种有效手段,有报道POI Ⅲ启动子转录小分子RNA存在效率不高,带有较多的非特异性序列等缺点,为了克服这些问题,表达反义VEGF RNA的人U6基因表达盒对人肝癌细胞株SMMC-7721 VEGF表达的抑制作用进行了研究.首先PCR扩增200bp VEGF cDNA以正、反向插入人U6 snRNA.通过测序证实反向插入的正确性.采用细胞原位杂交,RNA酶保护分析,Northern印迹来证实反义RNA表达的情况,利用RT-PCR方法研究了其对人肝癌细胞株SMMC-7721 VEGF表达的抑制效果.细胞原位杂交结果显示U6启动子转录产物主要分布于细胞核内,细胞浆内亦有表达,RNA酶保护分析显示U6基因POI Ⅲ启动子能高表达所需大小反义RNA,Northern印迹结果显示脂质体lipofectamine介导含U6基因POI Ⅲ启动子的质粒转染人肝癌细胞株SMMC-7721后12 h即有表达且可持续表达6 d.RT-PCR证实U6基因POI Ⅲ启动子转录的反义VEGF RNA能有效抑制SMMC-7721细胞VEGF的mRNA表达.已有的研究结果揭示POI Ⅲ启动子是反义基因治疗中一种好的选择.
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分类号
Q74（生物小分子的结构和功能）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1007-7626.2000.03.020
发布时间
2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（39870771）
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