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耐热碱性磷酸酯酶的功能结构域的定位

Location on the Functional Domain of Thermostable Alkaline Phosphatase

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学术成果认领

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摘要为了确定耐热碱性磷酸酯酶(TAPND27)发挥活性所必需的功能结构城,通过PCR介导的诱变缺失,得到了N端分别缺失8、16、25个氨基酸的3个缺失体pTAPN8、pTAPN16和pTAPN25以及C端分别缺失10和30个氨基酸的两个缺失体pTAPC10和pTAPC30.经表达和活性测定,发现pTAPN8和TAPC10保持了较高的活性而其余3个缺失体则失去酶活性.据此,TAPND27的活性区域被定位在8～465氨基酸之间.在分离纯化的基础上测定了一些酶学性质.发现TAPN8和TAPC10的比活没有大的改变,Tm下降了5.5℃;TAPN8的最适反应温度上升了10℃.结果提示了N端和C端的这些氨基酸残基对热稳定性有一定的贡献,N端氨基酸残基还对酶的亲热性有贡献.

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作者季朝能 ^[1] 盛小禹 ^[1] 姜涛 ^[1] 金? ^[1] 毛裕民 ^[1] 学术成果认领

作者单位复旦大学生命科学学院遗传所, ^[1]

关键词耐热碱性磷酸酯酶功能结构域定位

主题词性(Sex)诱变(Mutagenesis)温度(Temperature)提示(Cues)热温度(Hot Temperature)

分类号 Q71

栏目名称 研究论文

DOI 10.3969/j.issn.1007-7626.2001.01.016

发布时间 2004-01-08

基金项目

国家自然科学基金

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中国生物化学与分子生物学报

中国生物化学与分子生物学报

2001年17卷1期

80-84页

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