换一批重组乳酸乳球菌X-脯氨酰-二肽酰基-氨基肽酶的纯化及动力学特性
Purification, Kinetic Characterization of Lactococcus lactis X-prolyl Dipeptidyl Aminopeptidase Recombined in E. coli
摘要重组的乳酸乳球菌X-脯氨酰-二肽酰基-氨基肽酶是一个工具酶, 它对基因构建的神经肽或活性多肽的转活具有重要意义. 通过细菌细胞的破碎, 洗涤, 冷冻离心, 透析, DEAE-纤维素-52柱层析等工艺过程达到电泳纯. 该酶比活为11.926 U/mg, 纯化倍数为14.37倍和总活性收率为55.56%.通过SDS-PAGE和凝胶柱层析法, 测得该二肽酶有单肽链组成, 分子量89 KD. 在该酶的动力学研究中, 针对特异性底物L-甘氨酰-L-脯氨酰-对-硝基苯胺, 求得该酶的米氏方程式1/V=0.048/[S]+0.2566(r=0.994). 它的Km值为0.1871 mmol/L, 最大反应速度Vmax为3.897 μmol*L-1*min-1. 该酶可被苯甲酰基磺酰氟, 胰蛋白酶抑制剂和Mn2+, Ba2+, Cu2+ and Zn2+等金属离子抑制, 但可被Mg2+激活. 进一步试验显示, 当Cu2+和Zn2+浓度增加到3.726 mmol/L, 抑制作用明显增强. 低浓度的EDTA-Na2 (≤0.6212 mmol/L)不影响酶的活性. 因此, 该X-脯氨酰-二肽酰基-氨基肽酶是一个金属离子非依赖性的丝氨酸蛋白酶.
更多相关知识
关键词
X-脯氨酰-二肽酰基-氨基肽酶酶纯化酶动力学特性X-prolyl dipeptidyl aminopeptidaseenzyme purificationkinetic characterization
分类号
Q556+.3（酶）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1007-7626.2003.02.002
发布时间
2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
- 浏览179
- 被引5
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
